کلونینگ اینترفرون لامبدا-۱ (اینترکولین-۲۹) انسانی از سلول های دندریتیک مشتق از مونوسیت و بیان آن در سلول هایhek۲۹۳t یوکاریوتی

زمینه و هدف: اینترفرون های نوع سه دارای سه لیگاند می باشند: ifn-λ1(il-29)، ifn-λ2(il-28a) و ifn-λ3(il-28b) که این سه لیگاند، گیرنده هترودایمر منحصر به فرد یکسانی را بکار می برند که از زنجیره های c‏rf2-12 (ifn-λ-r1/il-28ra) و crf2-4(il10-r-b) تشکیل یافته است. اینترفرون های لامبدا چندین خصوصیت از جمله فعالیت های ضد ویروسی، ضد تکثیری، ایمونومدولاتوری و فعالیت ضد توموری در in vivo را نشان می دهند. هدف این مطالعه کلون کردن ژن ifn-λ1 بدست آمده از سلول های دندریتیک و بررسی تولید پروتئین آن در حامل بیانی یوکاریوتی می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه آزمایشگاهی، rna تام از سلول های دندریتیک مشتق شده از مونوسیت تحریک شده با صد ng/ml از lpsاستخراج گردید. cdna از rna کل سنتز شد. سپس cdna مربوط به ifn-λ1 با پرایمرهای اختصاصی توسط pcr تکثیر و در داخل حامل ptz57r/tدر اشرشیاکلی سویه dh5α کلون شد. سپس با استفاده از اندونوکلئازهای محدودالاثر kpni و bamhi به داخل پلاسمید pcdna3.1+ ساب کلون شد. بعد از انتقال به hek293t، بیان پروتئین توسط روش elisa ساندویچی تایید شد. نتایج: توالی dna وارد شده مشابه با توالی کد کننده ifn-λ1 موجود در gene bank بود. ژن ifn-λ1 در سلول های ترانسفکت شده رونویسی و بیان آن در سلول های hek293t توسط الیزای ساندویچی تأئید گردید. نتیجه گیری: کلونینگ و بیان موفق ifn-λ1 می تواند نخستین گام برای تولید و تحقیقات بیشتر درباره فعالیت های این سایتوکاین و فراهم آوردن زمینه های تحقیقاتی برای کسب روش های درمانی جدید برای سرطان، عفونت های ویروسی، بیماری های خود ایمنی و آلرژی و طراحی واکسن های مؤثرتر بکار رود